优质蜂王浆 摘 要: 蜂王浆是哺育蜂咽下腺分泌的富含蛋白质和氨基酸、游离脂肪酸、微量元素和维生素等的天然功能性蜂产品,具有滋补保健和延年益寿的功能。 中国是世界蜂王浆第一生产国和出口国。蜂王浆不易保存,极易变质,因而蜂王浆的品质与其新鲜度密切相关。 现行的蜂王浆国标和国际标准对评价和质控具有指导性意义,但一些核心指标偏低和最重要的新鲜度指标的缺失对产业可持续发展不利。 因此,探求和建立优质蜂王浆评价方法势在必行。本文根据蜂王浆成分和功能研究进展,探索性提出优质蜂王浆的 10- HAD 含量至少应为 1.8%; 同时,MRJP3 和 MRJP4 应增加为优质蜂王浆新鲜度的判定指标,其含量应分别大于或等于 0.8g/100g 和 0.2g/100g,以期对产业发展具有一定引领和指导意义。
第二部分
蜂王浆主蛋白含量变化可真实反应蜂王浆新鲜度,应纳入优质蜂王浆质量指标蜂王浆具有重要的生物学功能与其含有的MRJPs密切相关[26, 42],在蜜蜂生物学方面,MRJPs 参与决定蜂群中雌性蜂的级型分化[43, 44],为幼虫发育提供必要的可利用氮元素以及可能在蜜蜂行为调控中起作用等[45-47]。
另外,MRJPs 对其他动物机体具有作用,主要表现为高效的抗菌活性,较强的免疫活性和促进特殊细胞增殖等[48]。例如,MRJP2具显著的有抗菌活性[49];MRJP3在体内外均有免疫调节作用[50]。MRJP功能证据少,发给你的文章里有很多 因而,MRJPs在蜂王浆中的含量直接影响蜂王浆的功能,是蜂王浆品质的标志。
蜂王浆主蛋白作为评价蜂王浆新鲜度的标准并非我们第一次提出。日本科学家Kamakura 等人在2001年提出,随着温度升高和储存时间的延长,蜂王浆中MRJPs 的含量也显著降低,其中一种57kD的蛋白可作为评价蜂王浆新鲜度的指标[30],实际上这种蛋白是MRJP1,也有人建立了ELISA法,通过准确定量MRJP1浓度来评价蜂王浆新鲜度[51],但含量在蜂王浆最高,做新鲜度指标不 合适,并且一直未能在产业上应用。
采用检测灵敏度较高的双相电泳和飞行时间质谱联用的方法发现,在4℃ 和-20℃的存放条件下,储存1年后,MRJPs含量显著降低,特别是MRJP3、MRJP4和MRJP5;特别是室温存放一 年后,MRJPs已经降解严重,MRJP3-5已经检测不到;建议采用MRJP5作为评价蜂王浆新鲜度的标准[52, 53]。
最近我们通过高分辨质谱和生化检测验证对蜂王浆中的所有蛋白质进行了一个随贮存温度和时间的监测, 发现蜂王浆中可溶性蛋白质随贮存温度的升高和时间的加长都有很大程度的降解;MRJP1-5的含量最高,且含量稳定,占总可溶性蛋白的80%以上,易于检测;
其中,MRJP1和MRJP2含量最高,但表现对温度不敏感,在室温和4℃存放4周降解不明显,甚至在37℃能够稳定存在1周。MRJP3-5对温度非常敏感,在室温和4℃存放随时间延长而逐渐降解,在室温存放2周开始,3种蛋白含量开始显著降低;MRJP4在这3中蛋白中含量最低,对高温也更加敏感,在37 ℃条件下存放3天,MRJP4就已经完全降解而检测不到(图2)。因此,MRJP3和MRJP4作为蜂王浆质量(新鲜度)检测的标记物最佳。
周;D和E,分别为4℃存放2周和4周;F,为-20℃存放4周;G和H,分别为37℃存放3天和7天。
根据上述原理,为了准确对这几种蜂王浆主蛋白进行准确定量,我们针对MRJP1-5制作了单抗,能够明确区分这5种同源性较高的蛋白质。利用MRJP3和MRJP4 的单抗,我们已经研发制作成了双夹心ELISA试剂盒, 分别对这两种蛋白进行准确定量。
双夹心ELISA需要获得针对受检蛋白的一对异性抗体,先将一种特异性抗体结合到固相载体上形成固相抗体,然后和待检样品中的相应抗原结合形成免疫复合物,洗涤后再加酶标记的另一特异性抗体与免疫复合物中抗原结合形成酶标抗体- 抗原-固相抗体复合物,加底物显色,判断抗原含量。由于采用了特异性抗体对,大大减少了假阳性反应。在进行同源性较高蛋白家族中某一种蛋白的定量时更加准确。
双夹心ELISA试剂盒体系稳定、准确性高,在实际检测中应用非常广泛 [54-56],也被应用于国家和地方检测标准。因而,通过对这两款试剂盒平行性和稳定性的多次检测,确定这两款试剂盒能够做到对MRJP3和MRJP4 的准确定量从而评定蜂王浆的新鲜度。
结论
基于上述研究进展与分析测试,我们认为优质蜂王浆的10-HAD含量至少应为1.8%;同时MRJP3和MRJP4 应增加为优质蜂王浆新鲜度的判定指标,其含量应分别大于或等于0.8g/100g和0.2g/100g。
由于理论研究和技术创新问题,蜂王浆新鲜度在现行的国标和国际标准都未曾涉及,但基于目前技术发展状况,将MRJP3和MRJP4 作为新鲜度指标时机基本成熟。将此新鲜度指标作为优质蜂王浆指标具有一定的创新,对引领产业发展具有重要意义。
蜂王浆对我国蜂产业发展至关重要,也是最具市场竞争力、最具高附加值的蜂产品。作为世界蜂王浆生产和出口第一大国,我们不仅只是生产大国,而且要通过科技创新,形成支撑产业发展的理论,通过技术创新和产品创造,实现引领消费,最终实现产业转型。
通过对近年来国内蜂王浆成分、功能研究以及蜂王浆标准的研读,我们在现有蜂王浆质量标准的基础上,尝试性提出了我国优质蜂王浆的标准,这对我国蜂产业发展具有重要意义。
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文字、图片均来自文章《我国优质蜂王浆评价指标的探索与建议》胡菡、李建科
素材来源于《中国蜂业》杂志,该杂志是由中华人民共和国农业部主管,中国农业科学院蜜蜂研究所、中国养蜂学会主办的养蜂科技刊物,1934年1月创刊。是中国期刊方阵双效期刊、中国农业核心期刊、中国学术期刊综合评价数据库统计源期刊、全国优秀科技期刊。